COLD-PCR: A powerful tool in routine-diagnostic for cost-neutral detection of minor clones using real-time PCR or pyrosequencing

Einleitung: Die COLD-PCR (co-amplification at lower denaturation temperature) ist eine neue Methode zur Anreicherung unterrepräsentierter Allele in Wildtyp (wt)-Mutanten (mt) Mischungen, unabhängig von der genauen Lokalisation der Mutation innerhalb der Sequenz. Die durch einen initialen Denaturierungsschritt erzeugten Heteroduplexe werden bei dem darauf folgenden Denaturierungsschritt bevorzugt geschmolzen und amplifiziert, was zu einer starken Anreicherung der mt-Allele führt. Dies macht es möglich, auch mit konventionellen Methoden solche Minor-Clones zu detektieren. Die molekulare Diagnostik sieht sich mit P…