Visualisierung und Quantifizierung der Cathepsin B-, K- und L-Aktivität in vitalen Knorpelzellen

Fragestellung: Proteolytische Enzyme wie Cathepsin B, K und L sind an zahlreichen pathologischen Prozessen beteiligt. Der Anteil der einzelnen Protease an der destruktiven Aktivität ist aber mit der effektiv vorhandenen Enzymaktivität verbunden. Dafür wurde eine Darstellung der Proteaseaktivität in lebenden Zellen mithilfe eines Fluoreszenzassays versucht. Methodik: Zur Visualisierung der Cathepsinaktivität wird dem serumfreien Medium ein spezifisches Substrat und ggf. ein spezifischer Inhibitor zugesetzt. Das native Enzym spaltet das synthetische Substrat. Dabei entsteht ein fluoreszierender Niederschlag, der i…